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加样方法：特别强调向试剂盒内加样的方法（它是写起来很麻烦，做起来很简单）每个包装箱内都备有一个金属三角支架（如下图1），将支架扣在桌面上，把试剂盒底部靠在或贴在支架一条直角边面上，使试剂盒倾斜约45°角。向大管内加样时，将大管一边靠近实验操作人员，将试剂盒底部靠在或贴在支架一条直角边面上，这样，试剂盒大管在下面倾斜约45°角，操作人员视觉正好看到试剂盒内部的结构（如图2）用无菌吸管吸取样品，对着气门出口位置加样，向哪个大管加样，对准哪个大管的气门出口位置，大管的样品加完后，平放试剂盒，看大管的气窗中是否有气泡，依照这样的操作方法，基本上可以保证气窗内没有气泡。加完样品后将试剂盒放置一会儿等培养基扩散开些再观察气泡更易看出。
另：1）、如果依照上述操作方法加样完成后，哪个管内有气泡，可以将试剂盒向前倾斜60~70°角轻轻用力在桌面敲击数下，以排出产气窗中的气泡，或用无菌吸管将有气泡的管内的液体吸出依照上面的加样方法再加入样品使试剂盒气窗内无气泡。
2）、金属支架起到支撑试剂盒倾斜45°角、便于加样的作用，试剂盒使用熟练后，可以不用金属支架的辅助，一手持试剂盒使其倾斜45°角，另一手持吸管对准气门出口位置加样。
3）、还可以用这样的方法加样使气窗内无气泡：平放试剂盒，向试剂盒每个管内加入无菌生理盐水，大管内加入约1ml, 加完后，将试剂盒向前倾斜60~70°角，将气窗内气泡排出，然后，平放试剂盒将检测样品加入试剂盒相应的管内。
4）、因塑料本身的性质，有时在试剂盒内侧壁、气门顶端附着个别小气泡不影响观察实验结果。

观察结果：将接种好样品的试剂盒，盖上盒盖儿，置36±1℃恒温培养箱培养18~24小时取出，平拿平放。观察试剂盒中每一管液体颜色及气窗有无气泡：
管内液体颜色为蓝紫色，气窗内无气泡，则报告为大肠菌群阴性；
管内液体颜色变黄，气窗内有气泡，则报告为大肠菌群阳性。
若做为大肠菌群检测初筛，可记录阳性管数，查MPN检索表报告之。
另：因液体的扩散速度，有时管内液体有一定的分层不影响观察实验结果。

若进行分离，证实试验，可将阳性管转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃恒温培养箱培养18~24小时，调取典型菌落进行革兰氏染色、镜检，若为革兰氏阴性无芽孢杆菌，挑取单个菌落放入10ml无菌生理盐水中混匀或用无菌吸管吹吸几次使其均匀制成菌悬液，用前面所述的加样方法加入新打开包装的试剂盒对应的管中，原来来自大管的菌落制成的菌悬液加在现在新打开包装的试剂盒相应的大管位置，加10ml；原来来自小管的菌落制成的菌悬液加在对应的试剂盒相应的小管位置，加1ml。样品加好后，盖上盒盖儿，平拿平放置36±1℃恒温培养箱培养18~24小时观察：
管内液体颜色为蓝紫色，气窗内无气泡，则报告为大肠菌群阴性；
管内液体颜色变黄，气窗内有气泡，则报告为大肠菌群阳性。
根据证实为大肠菌群阳性管数，查MPN检索表报告之。